医院PCR实验室建设中应注意哪些问题

国家卫健委对于独立医学检验中心新建PCR实验室给出了明确的指导方案，特别是对于实验室面积更是进行了严格要求，但是医院一般相对来说没有那么大的实验室面积，所以他们只能根据现有的条件去建设或者改造PCR实验室，由于面积有限，空间高度又较低，在这样的条件下怎么才能建设好一个PCR实验室呢？

一、平面布局

PCR实验室基本由五大结构组成，常见为：PCR专用走廊、试剂准备区、标本制备区、扩增区和扩增分析区，每个实验房间都有一个缓冲区。如果实验室面积较小的话，可建议把四区改成三区，即试剂准备区、标本制备区和扩增分析区，甚至改成两区，即试剂准备区和基因检测区。根据实验室的实际区域情况配备相应的检测设备。另外如果实验室的进深较短，建议不设立PCR专用走廊，但是各实验区缓冲间的门必须安装互锁装置，每个外门上都安装门禁装置，门上须有可视窗，门口有明确的标识，包含：生物防护级别、操作的致病性生物因子、实验室负责人、紧急联系方式以及国际通用的生物危险符号等。

二、设计要点  

1、主体主要为彩钢板材质，室内所有的阴角、阳角均采用铝合金50内圆角铝，结构坚固、密封性好。地面建议使用PVC卷材地面或自流坪地面，整体性好，耐腐蚀。    

2、无论将PCR实验室分割成四个、三个还是两个独立的实验区，每个区域都应有独立的缓冲间，整个区域就是一个整体的缓冲走廊，通过各区域对气压的调节，整个PCR实验室避免受到气溶胶的污染。    

3、缓冲间和PCR扩增区的排风扇往外排气，外墙和各扇门上都安装有风量可调的回风口，空气通过回风口向室内换气。    

4、实验区和缓冲间顶部以及传送窗内配置紫外灯消毒，对于试剂准备区和标本制备区，可配置移动紫外线灯进行局面的消毒。    

5、PCR实验室可以是分散形式，也可以是组合形式。完成一组PCR实验，通常应经过试剂配制、样品处理、核酸扩增及产物分析四个实验过程，若实验工艺需要，还应增加样品粉碎过程。    

6、试剂准备和样本制备区为微正压，核酸扩增室及产物分析室应呈微负压，以防含核酸的气溶胶扩散出去污染试剂与样品，可以通过控制排风风量大于进风风量达到负压效果。    

7、在理想情况下，PCR实验室缓冲间内，可设置正压，使室内空气不流向室外，室外空气不流向室内。   

8、若房间进深允许，可设PCR内部专用走廊。需要指出的是在减少室内外空气交换方面，缓冲间比专用走廊较有意义。    

9、每个区域之间应具备单向的实验工艺流、物流、人与气流，形成单向流程的保护屏障，这样避免实验的相互干扰，避免核酸气溶胶对实验过程造成污染产生假性结果。

10、如果实验室整体房间较低，可考虑把新风机和排风机设置到走廊或者实验室以外的位置，风管采用圆管或扁平管，铺设完成后做加压和漏风量测试，对于风管接口和阀门处等严格按照施工工艺操作，尽量减少去夹层的维修频率。

三、基本设备

按照标准四区的划分，每个区域的基本设备配置如下：

1、试剂制备区

功能：主要是作为贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备，试剂和用于标本制作的材料应直接运送至该区，不得经过其它区域。试剂原材料需贮存在本区内，并在本区内制备成所需的贮存试剂。所需要的仪器设备：

超净台、天平、移液器、混匀仪、冰箱（不需要-80）、离心机、加样器、振荡器、消毒车、灭菌锅等。 

2、样本制备区

功能：临床标本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定RNA时DNA的合成。所需要的仪器设备：

冰箱（-80）、生物安全柜、离心机、移液器、消毒车、混匀仪、超净台、加样器、振荡器、恒温水浴等。

3、核酸扩增区

功能：主要是DNA扩增，已制备的DNA模板和合成的DNA和主反应混合液，制备成反应混合液等，也可以在本区域内进行。在PCR测定中，通常在扩增后须打开反应管。所需要的仪器设备：

基因扩增仪、荧光定量PCR仪、核酸提取仪、移液器、超净台、消毒车、超净台、冰箱、离心机、加样器等。

4、产物分析区

功能：主要进行的操作为扩增片段的测定，如使用全自动封闭分析仪器检测，需要仪器设备：

酶标仪、洗板机、移液器、消毒车、加样器、水浴箱等。此外，部分检测可能还用到电泳仪、凝胶成像系统/紫外检测仪以及电炉等。