细胞培养无菌室，是我们培养细胞和相关实验赖以操作的大环境，保证大环境的洁净要求，是防止细胞污染的有效途径，细胞的良好状态也会给我们细胞相关实验提供有力的保证。就一些小细节部分与大家分享一下。
1 无菌室应设有无菌操作间和缓冲间；无菌室内的地面、墙壁必须平整，不易藏污纳垢，便于清洗；无菌室应保持清洁，严禁堆放杂物，以防污染。
2 无菌室应备有常用消毒剂，方便使用。如三氯异氰尿酸泡腾片（健之素消毒剂）、5％甲酚溶液，70％酒精，0.1％新洁尔灭溶液等。使用健之素消毒剂消毒时应配制成适宜的浓度。
3 无菌物品必须保存在无菌包或灭菌容器内，应按消毒日期顺序放置在固定的柜橱内，并保持清洁干燥，与非灭菌品分开放置，并经常检查无菌包或容器是否过期。无菌包一经打开即不能视为绝对无菌，应尽早使用。凡已取出的无菌物品虽未使用也不可再放回无菌容器内。
4 操作人员进入无菌室应先关掉紫外灯，至少15min后方可入内。进入无菌室前，先用肥皂或消毒液洗手消毒，在缓冲间更换专用工作服、鞋、帽子、口罩和手套(或用70%的乙醇再次擦拭双手)。
5 做完实验后清理操作台，用消毒剂擦拭台面及操作台上的物品，为下一次实验做好准备。
6 超净台是利用空气层流装置排除工作台面上部包括微生物在内的各种微小尘埃。通过电动装置使空气通过高效过滤器具后进入工作台面，使台面始终保持在流动无菌空气控制之下。在接近外部的一方有一道高速流动的气帘防止外部带菌空气进入。必须定期检查超净台气帘的可靠性。
7 超净台中试验所用物品和耗材，应摆放整齐；除电动助吸器、移液枪、真空泵吸头外，所用物品一律用酒精浸泡过的镊子夹取，不得用手直接接触。超净台试验开始前，应用70～75%的酒精棉球擦拭台面，试验中如有液滴滴在台面上，亦应立即用酒精棉擦除。操作前双手用酒精喷洒，试验中双手离开超净台，再回超净台时，须再次喷洒酒精。超净台试验中，有试剂或者培养液的瓶子或者培养皿，不宜敞盖太久，盖子朝下放置于台面。超净台试验中，从外拿入超净台的试剂瓶或者其他物品，应用酒精认真擦拭其外表面。
8 CO2培养箱要定期检查、清洗、消毒。清洗时应拆下内部组件，彻底清洗，用过氧乙酸擦拭后再用新洁尔灭擦拭，然后用酒精擦拭，安装好后用紫外照射箱内30min。每次操作时都要将培养箱彻底擦拭；箱内培养皿、培养板要合理放置，叠加不要超过三层。
9 严防污染事件发生。污染细胞株、污染耗材等应通通丢弃；“宁可错杀一千，不可放过一个”。
10 无菌室应每月检查菌落数。在超净工作台开启的状态下，取内径90mm的无菌培养皿若干，无菌操作分别注入融化并冷却至约45℃的营养琼脂培养基约15ml，放至凝固后，倒置于30～35℃培养箱培养48小时，证明无菌后，取平板3～5个，分别放置工作位置的左中右等处，开盖暴露30分钟后，倒置于30～35℃培养箱培养48小时，取出检查。100级洁净区平板杂菌数平均不得超过1个菌落，10000级洁净室平均不得超过3个菌落。如超过限度，应对无菌室进行彻底消毒，直至重复检查合乎要求为止。
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